Определение флаванолов и процианидинов какао (DP1-7): официальный метод AOAC

Флаванолы и процианидины какао (CF) представляют собой группу флавоноидов, широко признанных за их потенциальную пользу для здоровья, вызывающую значительный интерес со стороны потребителей, промышленности и исследователей. Точные и надежные методы количественного определения этих отдельных соединений в продуктах на основе какао необходимы как для научных, так и для коммерческих целей.

Наиболее строго проверенным подходом к измерению флаванолов и процианидинов какао (до степени полимеризации DP1-7) является Официальный метод анализа AOAC 2020.05.

Основная методология: HILIC-ВЭЖХ с детектированием флуоресценции.

В методе AOAC 2020.05 используется хроматография гидрофильного взаимодействия (HILIC) в сочетании с флуоресцентным детектором (FLD) для достижения точных и воспроизводимых результатов.

1. Подготовка проб (экстракция)

Пробоподготовка адаптирована к матрице какао:

• Удаление липидов (обезжиривание). Для образцов, которые, как ожидается, будут содержать более 10% жира, таких как шоколад, какао-тертое и какао-порошок, материал сначала экстрагируется гексаном для удаления липидных компонентов.

• Экстракция флаванолов: флаванолы и процианидины (DP 1-7) затем экстрагируются из обезжиренного материала (или непосредственно из экстрактов какао) с использованием подкисленной водной системы растворителей ацетона, известной как AWAA (ацетон-вода-уксусная кислота). Смесь перемешивают и обрабатывают ультразвуком на бане при 50°С с последующим центрифугированием.

• Очистка (ТФЭ): Если нет необходимости для конкретной матрицы (например, экстракта какао), экстракционный раствор очищается с использованием картриджа для твердофазной экстракции (ТФЭ) MCX PRIME. Этот шаг имеет решающее значение для устранения компонентов матрицы, которые могут накапливаться в колонке и ухудшать аналитические характеристики.

2. Хроматография (HILIC) и детекция (FLD)

• Хроматографическая система: анализ проводится с использованием системы ВЭЖХ с термостатируемым колоночным отделением и автосамплером. Требуемая колонка — Torus Diol (внутренний диаметр 100*3,0 мм, размер частиц 1,7 мкм).

• Подвижная фаза: используется бинарный градиент, состоящий из растворителя A (ацетонитрил-уксусная кислота) и растворителя B (метанол-вода-уксусная кислота).

• Обнаружение флуоресценции: флаванолы и процианидины обнаруживаются с использованием FLD с длиной волны возбуждения 230 нм и длиной волны излучения 321 нм. Крайне важно, чтобы настройка усиления фотоумножительной трубки (ФЭУ) была оптимизирована для обеспечения линейности для мономеров (DP1), сохраняя при этом чувствительность для высших олигомеров (до DP7).

3. Количественная оценка и расчет

• Калибровка: В методе в качестве калибранта используется эталонный материал экстракта какао NIST RM 8403. Для DP1–DP7 построены семь отдельных стандартных кривых.

• Интеграция: Для количественной оценки отдельных пиков DP (DP1-7) используется метод интегрирования по принципу «впадина-в-впадина».

• Total CF: Общее содержание флаванолов в какао (Total CF) рассчитывается как сумма отдельных значений CF _DPn .

Валидация и эффективность метода

Совместное исследование подтвердило точность метода AOAC 2020.05 путем тестирования семи различных матриц какао с общим содержанием CF в диапазоне от 1,0 до 500 мг/г.

• Повторяемость (RSD _r ): Относительное стандартное отклонение повторяемости колебалось от 1,6 до 4,8%. Это демонстрирует отличную внутрилабораторную стабильность и соответствует ожиданиям производительности, установленным AOAC.

• Воспроизводимость (RSD _R ): Относительное стандартное отклонение воспроизводимости колебалось от 5,8 до 22,4%.

• значения обычно были ниже 10% для большинства матриц, демонстрируя хорошую точность в разных лабораториях.

• Результаты соответствовали целевому ожиданию RSD _R <8% для четырех матриц (какао-порошок, экстракт какао, готовые к смешиванию порошковые пищевые добавки и шоколад для выпечки).

• Примечание по молочному шоколаду: воспроизводимость для молочного шоколада составила 22,4%. Столь низкие характеристики объясняются очень низкой концентрацией CF (около 1 мг/г), обнаруженной в этой матрице.

Рекомендация: На основании результатов рекомендуется ограничить применение Метода AOAC 2020.05 продуктами с массовой долей флаванолов какао выше 5 мг/г.

Это успешное совместное исследование поддерживает повышение официального метода анализа AOAC 2020.05 до статуса окончательного действия для оцененных матриц, укрепляя его роль как авторитетного метода определения флаванолов и процианидинов какао.